Literatura: principal fonte de dados, em função das classes de compostos a serem isolados e matrizes biológicas a serem estudadas.

A experiência na utilização de técnicas de isolamento e purificação é MUITO importante. Quanto mais experiência, mais facilmente pode-se adotar critérios para a seleção de fases estacionárias e eluentes apropriados para a separação e purificação de produtos naturais.

Dentre todos os métodos disponíveis para o isolamento e purificação de produtos naturais, como cristalização, partições, filtração através de membranas, a cromatografia é de longe o mais utilizado.

Cromatografia

Princípio básico: distribuição de substâncias (compostos orgânicos) entre duas fases:

A – fase móvel: eluente

B – fase estacionária

A separação será resultante da maneira como um composto se distribui entre estas duas fases,

Onde K_D = coeficiente de distribuição.

Os solutos (diferentes X) estarão em um equilíbrio dinâmico constante entre as duas fases. A direção do equilíbrio será determinada de acordo com a força de interação dos solutos com a fase estacionária e a “competição” da fase estacionária entre os solutos e a fase móvel.

Seletividade (α)

Seletividade é o principal fator que determina a eficácia da separação em um processo cromatográfico. Mesmo que dois compostos apresentem o mesmo K_D, deve-se levar em conta que a cromatografia líquida apresenta três interações simultâneas, resultantes da aplicação das forças de interação mencionadas:

Consequentemente, em se alterando a natureza química da fase móvel ou da fase estacionária, é possível se “balancear” estas três interações. Para isso, deve-se levar em conta dois princípios:

1. Em sistemas de separação que se utilizam de solventes orgânicos, sejam sozinhos ou na forma de misturas, alterando-se o solvente orgânico utilizado altera-se a seletividade do processo de separação. Porém, deverá ser alterada a proporção entre os solventes, se estes estiverem sendo utilizados na forma de misturas (quase 100% dos casos).

2. A força polar de um sistema que utiliza água como parte da mistura eluente pode ser alterada em se adicionando modificadores tais como ácidos, bases (menos comum e com MUITA PRECAUÇÃO, uma vez que muitas fases estacionárias são sensíveis a bases), soluções tampão de sais inorgânicos, ou mesmo pela simples adição de sais (NaCl, NH₄Cl).

Os solventes orgânicos podem ser classificados de acordo com suas características como doadores de prótons (ácidos de Bronsted-Lowry), aceptores de prótons (bases de Bronsted-Lowry) ou como suscetíveis a formar interações dipolo-dipolo.

Fases móveis constituídas por misturas de 3 solventes podem ser otimizadas quanto maior for sua separação no triângulo de seletividade dos solventes.

As interações fase móvel – fase estacionária são extremamente importantes. Por exemplo, em muitas colunas de fase reversa (C₁₈, C₈, C₄, C₂), existem grupos silanóis livres que podem interagir fortemente com os solutos, piorando a separação e promovendo o surgimento de “cauda” nos picos cromatográficos. A adição de modificadores na fase móvel (principalmente tampões), altera significativamente as interações soluto-fase móvel, principalmente no caso de sompostos básicos.

Deve-se levar em conta que inúmeros fatores de interação ocorrem simultaneamente em um processo de separação cromatográfica, e por isso é importante se conhecer o comportamento das fases estacionárias frente aos diferentes tipos de soluto e de eluentes a serem utilizados.

Categorias:química de produtos naturais

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