Desreplicação: o que é e para que serve?

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O termo “desreplicação” (do inglês, dereplication) foi inicialmente introduzido na literatura científico-acadêmica no início dos anos 90, tendo sido definido como “uma etapa crucial no processo de triagem (screening) de extratos brutos, objetivando estabelecer o grau de ineditismo de substâncias presentes nestes extratos, de maneira a se evitar o re-isolamento e determinação estrutural de uma substância que não seja inédita. O processo de desreplicação foi inicialmente utilizado para a busca de substâncias específicas em meios de crescimento de diferentes linhagens de microrganismos. Simultaneamente, o termo dereplication foi utilizado pela primeira vez em processo de triagem de extratos com atividade antiviral (anti-HIV) realizado por pesquisadores do National Câncer Institute (NCI) dos EUA. A partir de então, este termo foi amplamente aceito e utilizado, tanto por pesquisadores da área acadêmica como da iniciativa privada, principalmente da indústria farmacêutica.

Técnicas de desreplicação foram continuamente desenvolvidas objetivando a busca de substâncias estruturalmente inéditas, na sua maioria apresentando atividades biológicas. Em 1996, pesquisadores da Hoescht e da Lepettit utilizaram técnicas de LC/MS (ESI) para analisar a presença dos antibióticos em meios de cultura produzidos por diferentes microrganismos. Zhou e Hamburger desenvolveram método para a análise simultânea de diversos produtos naturais, utilizando ionização por eletrospray (ESI) no caso de substâncias polares e ionização química à pressão atmosférica (APCI, atmospheric pressure chemical ionisation) para a análise de substâncias moderadamente polares, e ambas mostraram ser de ampla aplicação. Vários sistemas de desreplicação foram desenvolvidos utilizando bioensaios.

LC-MS

As metodologias de desreplicação incluem a utilização rotineira de técnicas cromatográficas hifenadas, as quais constituem poderosas ferramentas para a análise preliminar de extratos brutos. As que utilizam cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) são as mais comumente utilizadas. Isso porque, dentre as técnicas hifenadas, são as que requerem menor quantidade de amostra para análise, além de menor tempo de análise. Todavia, diversas técnicas de desreplicação e análise de produtos naturais que utilizam a hifenação LC-RMN foram desenvolvidas, apesar de seu alto custo, tanto dos equipamentos para análise como da técnica per se. Outras incluem o uso de sistemas multi hifenados, tais como LC-PDA-MS, LC-SPE-RMN, LC-MS/MS, dentre outras.

As análises de desreplicação estão atualmente muito bem estabelecidas no âmbito da pesquisa em produtos naturais, devido à sua versatilidade, rapidez, confiabilidade e reprodutibilidade na análise de extratos brutos, de maneira a prover uma rápida priorização de extratos e substâncias a serem isoladas, evitando-se o re-isolamento de substâncias já conhecidas.   Na verdade, atualmente se considera que a desreplicação constitui uma etapa absolutamente essencial na descoberta de produtos naturais bioativos estruturalmente inéditos. Sendo assim, o processo de desreplicação na pesquisa e descoberta de produtos naturais deve ser cada vez mais utilizado e aprimorado.

Literatura básica: Vanmiddlesworth, F., Cannell, R.J.P. Dereplication and partial identification of natural products. Methods in Biotechnology, 1998, 4 (Natural Products Isolation), 279-327.



Categorias:ciência, química

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