A revelação de placas cromatográficas de camada delgada pode ser uma ferramenta muito útil na avaliação preliminar do perfil químico de um extrato bruto. Dezenas de reveladores para placas de CCD são descritos na literatura, sendo o livro de Egon Stahl uma referência das mais importantes (Thin-layer chromatography. Springer-Verlag New York, 1969. 1041 páginas). A revelação da placa pode ser feita com os mais diversos reagentes (para uma lista bastante completa, ver o livro de Stahl), com o intuito de detectar compostos orgânicos com os mais variados grupos funcionais.
Reagentes de revelação mais comumente utilizados:
EtOH-H2SO4 8:2 revelador universal (forte agente oxidante).
EtOH-H2SO4+vanilina revelador “quase” universal para quase todas substâncias, em particular terpenos e derivados de policetídeos.
EtOH – H2SO4 + anisaldeído idem.
EtOH + ácido fosfomolíbdico 95:5 para esteróis e derivados de lipídios.
EtOH + SnCl3 (cloreto de antimônio) 9:1 para flavonóides.
8-hidroxiquinoleína + hipobromito de sódio (reagente de Sakaguchi) bom para derivados guanidínicos.
α-naftol + hipobromito de sódio para derivados guanidínicos.
EtOH + ninidrina 99:1 para aminoácidos e aminas primárias.
AgNO3 + azul de bromofenol para purinas.
Nitroprussiato de sódio + hexacianoferrato de potássio para guanidinas, uréias, tiouréias.
KMnO4 + Na2CO3 para ácidos carboxílicos.
Dragendorff (BiNO3 + ácido +KCl + água): existem pelo menos 5 preparações diferentes do revelador de Dragendorff para alcalóides (aminas secundárias, terciárias e sais de amônio quaternário).
Vapor de cristais de I2 (iodo) para substâncias com duplas ligações (inclusive aromáticas).
Iodoplatinato de Potássio (caro!) para alcalóides.
“Screening” por ccd de amostras desconhecidas.
1. Extrair 1 g de amostra com 10 mL de MeOH/CH2Cl2.
2. Evaporar o solvente até volume de 0.5 ou 1 mL.
3. Aplicar a amostra com capilar em 4 placas de ccd.
4. Aplicar padrões desejados em cada placa.
5. Eluir as 4 placas com o mesmo solvente (hex-AcOEt 8:2 ou CH2Cl2-MeOH 9:1).
6. Observar as placas em 254 e 365 nm, e depois revelar separadamente com:
– ácido fosfomolíbdico
– Dragendorff
– Vanilina-ácido sulfúrico
– Ninidrina
“Screening” alternativo (segundo Wagner e Bladt, “Plant Drug Analysis”):
1. Extrair 1 g de amostra com 5 mL de MeOH (polares).
2. Extrair 1 g de amostra com CH2Cl2 (apolares).
3. Aplicar cada extrato em 10 placas de ccd.
4. Eluir cada conjunto de 10 em cada um dos seguintes solventes:
– para o extrato MeOH: AcOEt-MeOH-H2O 100:13.5:10
– para o extrato CH2Cl2: Tol-AcOEt 93:7
5. Detecção:
– Inspecionar à luz UV em 254 e 265 nm.
– Borrifar com solução de KOH em EtOH:
Manchas vermelhas em 365 nm: antraquinonas
Manchas amarelas em 365 nm: antronas
Manchas azuis em 365 nm: cumarinas
Manchas cor-de-rosa ou violeta à luz visível: glicosídios cardiotônicos
Manchas vermelho-marrom: alcalóides
Manchas fluorescentes amarelas, laranja e verdes: flavonóides
Manchas azuis, vermelhas ou marrons no visível: terpenos
Reproduções de análises de CCD do livro “Plant Drug Analysis”, H. Wagner e S. Bladt, Springer, Berlin, 1996.
Atualização em 6/12/2011: para uma boa lista de “receitas” de reveladores, veja aqui.
Categorias:química de produtos naturais
A Química da Vida 
Sou estudante pesquisador da UFPA.
Estou com extrato AcOEt e CH2Cl2.
Tentando encontra um melhor sistema de separação.
Oi Rainiomar,
Tudo depende do(s) tipo(s) de substâncias presentes nos teus extratos. No caso de um extrato CH2Cl2, você deve ter substâncias apolares e medianamente polares. Neste caso, a separação por CCD pode ser feita em silica-gel, e alguns possíveis eluentes são hexano/AcOEt/MeOH em proporção 80:19:1. No caso do extrato AcOEt, o uso de misturas um pouco mais polares pode ser necessário. Experimente diferentes misturas de solventes, sempre utilizando um mais apolar (hexano, ou CH2Cl2) e um mais polar (AcOEt, MeOH, EtOH). Às vezes adicionar algumas (poucas) gotas de ácido acético ao eluente ajuda a obter manchas de melhor qualidade (melhor resolvidas).
Bom trabalho!
saudações,
Roberto.
Que revelador eu posso utilizar que seja especifico para flavonoides…
Scarlat,
Como mencionado na postagem, o livro “Plant Drug Analysis”, de H. Wagner e S. Bladt, fornecem indicações de reveladores para muitas classes de produtos naturais.
Olá. Gostaria de saber qual o nome do revelador formado a partir de uma mistura 1:1 de vanilina sulfúrica e ácido perclórico.
Obrigada
Bruna
Oi Bruna,
Realmente não sei o nome deste revelador. Mas acredito que deva ser um oxidante muito forte, tal como vanilina-ácido sulfúrico.
Roberto.
Ola Roberto !!!
Que revelador eu posso usar para identificar iridoides?
Oi Jaciara,
Especificamente iridóides eu não sei, mas acredito que ácido sulfúrico com vanilina ou com anisaldeído devem revelar estes compostos.
Tudo de bom,
Roberto
Ola Roberto…
Você tem um artigo ou trabalho publicado onde eu possa usar as referencias caso use as informações desta pagina.
A referência que usei foi “Plant Drug Analysis”, H. Wagner e S. Bladt, Springer, Berlin, 1996. Mas se quiser citar esta página, é só citar o link
http://quiprona.wordpress.com/2009/05/10/sobre-separacoes-cromatograficas-por-ccd-ii-reveladores/
Roberto
Olá, revelei uma CCDC com iodo, quero saber se depois de três dias eu consigo ver fluorescencia na UV nessa mesma placa?
Oi Flávia,
Na verdade, não sei. Porque você não faz o experimento? Desenvolva uma placa de CCDC para revelar com iodo e depois com fluorescência, e desenvolva outra placa sem revelar com iodo e observar a fluorescência, para comparação.
Depois conte como aconteceu.
Roberto
Olá Roberto, será que eu posso usar a ninidrina para amostras de carotenóides? Agradeço. Aline.
Oi Aline,
Não sei se ninidrina revela carotenóides. Eu acho que não. Carotenóides podem ser visualizados diretamente na placa, sem reagentes, pois são coloridos (cor-de-laranja intenso, vermelhos e amarelos).
Tudo de bom,
Roberto
Olá,
Gostaria de um uma dica de revelador para identificar aminas, que não seja a ninidrina.
Oi Adriana,
Veja uma lista bastante boa, neste link: http://bit.ly/sNbE8I. Neste documento, veja a receita de ácio nítrico + etanol.
Bom trabalho!
Roberto
Muito obrigada Roberto. Vou realizar os experimentos e logo darei uma resposta, mas vai dar certo sim.